Propolis anti -light veroudering en invloedanalyse معدات اختبار

Wanneer de huid wordt blootgesteld aan ultraviolette stralen, zal overmatige actieve zuurstof (ROS) [1] een veroudering -gerelateerde genexpressie genereren [2], waardoor inflammatoire gecombineerde reacties worden geïnduceerd en elastische eiwit- en collagene -expressievolume verminderen. [3], leidend tot verouderend fenomeen zoals ontspanning en rimpels van de huid [4-6]. In het proces van huidweerstand is de expressie van genen eigenlijk de veel voorkomende expressie van beschermende genen en schadegenen. Beschermende genen omvatten voornamelijk matrixmetaalprotease (MMP's (MMP's (MMP's (MMP's ) Familie-eiwitremmende genen en de remmende genen van apoptose [7,8], en het schade-gen omvat voornamelijk collageenafbraakgerelateerde genen en elastische eiwitafbraakgerelateerde genen. Het matrixmetaalprotease-1 (MMP-1) is afbraak ⅰ en de Het belangrijkste enzym van type III collageen [9], wanneer de huidcellen overdreven MMP-1 tot expressie worden gebracht, is de structuur van de extracellulaire matrix van de dermislaag ernstig beschadigd [10], met name de normale structuur van collageenvezels en elastische vezels is Serieus beïnvloed [11], dus MMP-1 is het belangrijkste enzym dat de symptomen van veroudering veroorzaakt, zoals rimpels en fijne lijnen [12] .MMP-1-afgifte is de belangrijkste indicator voor de evaluatie van optische veroudering. De toename van het gehalte van ROS -gehalte zal de apoptose en zelfs de dood de snelheid versnellen [13]. Tijdens het verouderen van de huid kan de UV -blootstelling overtollige ROS in de huidcel veroorzaken, wat een verscheidenheid aan biologische effecten van het huidweefsel veroorzaakt [14] pelomium [14] pelomium , afname van antioxiderende enzymexpressie, enz. [16]. Daarom is ROS -gehalte ook een belangrijke indicator voor de mate van lichtveroudering.

Propolisook bekend als paars goud, die rijk is aan flavonoïden, flavonoïden, flavonoïden, Flavonoïden, flavonoïden, flavonoïden, flavonoïden, flavonoïden, flavonoïden, flavonoïden, flavonoïden, flavonoïden, flavonoïden, flavonoïden, flavonoïden. Klasse stoffen zijn effectieve antioxidanten die kunnen voorkomen dat vrije radicalen kunnen worden voorkomen, cellen van vrije radicale schade [17], propolis -flavonoïden kunnen voorkomen. Hersenweefsel vrije radicale peroxidatie en veroorzaken schade [18]. ESCIN heeft ook een sterke antioxidantactiviteit [19]. Het antioxidantmechanisme van propolisvoornamelijk om de oxidatie van het lichaam te reguleren mdash; herstel de balans door directe of indirecte regulatie van de ROS van de ROS van het lichaam. [20]. Tot nu toe is bewezen dat propolis verschillende functies heeft, zoals anti -oxidatie, het verwijderen van vrije radicalen en immuunregulatie, maar het is zeldzaam om het verouderen van huidlicht te vertragen. Het oxidatiebeschadigmodel wordt geëvalueerd Door de verwijderingssnelheid van de propolis te analyseren, oxidatiegerelateerde gen MMP-1-expressie en MMP-1-gehalte om het vertraagde huidverouderingseffect van propolis te evalueren en een basis te bieden voor de ontwikkeling en toepassing van propolis bij het verouderen van huidlicht. 

 

 

1 materiaal en methode

1.1 Materialen en reagentia

Propolis absorberend door populieren (geproduceerd in Henan) drogen door watervrij drogen Ethanol, donkerbruine vaste stof, heeft een speciaal aroma, opslag bij -20 ° C bevroren.

Vezelcellen (TaKaRa)、 RNA -extractkit (Takara), reverse transcriptiekit (Takara), fluorescerende kleurstoffen (Takara), ROS -detectiereagentia (Invitrogen), ELISA -kits (ABCAM). 5%, oplosbaar propolis -extract met 75%ethanol, bruine en zwarte vloeistof, kamer temperature preservation; propolis polyethylene glycol sample: propolis concentration is 5%, 75%polyethylene glycol dissolved propolis, brown and black liquid, brown and black liquid,,, brown and black liquid, Board temperature preservation.

]

1.2 Instrument en apparatuur

 

Analyse van Denver TB-215D, Milli-Q Intergral Pure Water/Super Pure Water Integrated System (Merk Millipore), hoog-efficiëntieve vloeistofchromatografie (AGLEN 1200), CO2-cultuur Box (thermo), ultra -Net workbench (su jing'antai), omgekeerde microscoop (Olympus), trace -oscillator (de link), enzym marker (biotek), PCR -instrument (bole), fluorescent kwantitatieve PCR (bol), constante thermostat (TYST), Stream Cytometer (Beckman).

 

Ethanoloplossing van 5 mg en middot; ml-1 is geconfigureerd met propolisabsorberen. Nadat het filtermembraan is gemengd, Plaats het in een efficiënte vloeibare kleurspectrometer om het te analyseren en te detecteren. -C18 (150 mm x 4,6 mm, 5 mu; m); Flowfase: methanol -1%Eleide; stroomsnelheid: 1,0 ml middot; min -1 ; detectiegolflengte: 280 nm; kolomtemperatuur: 36 ℃; monstervolume: 2 mu; l;

Het gradiëntelutieproces is: 0-25 min, 20%tot 40%methanol; 25-55 min; , 40%tot 55%methanol; 55-70 min, 55%methanol; 70; 70 ~ 85 min, 55%tot 100%methanol.

 

1,4 Cytische detectie gebaseerd op menselijke fibroblasten

 

Er zijn 2 monsters in deze test, stel 8 monsters in, stel 8 in bij de concentratiegradiënt, stel 3 herhalingsgaten in bij elke concentratie. Tegelijkertijd stelt de test het oplosmiddelregelgat in, Zero -Pores ((Zero -waarden ( inclusief 10% nieuw gebleven rundvlees serum lage suiker DMEM -medium), positief controlegat (8% DMSO). Deze test geeft MTT door MTTTT -methode om de vitaliteit van cellen te detecteren en de maximale veiligheidsconcentratie van celtoediening te screenen. De specifieke werkingsstappen. De specifieke werkingsstappen. zijn als volgt:

 

Bereiding van celophanging,Na de spijsvertering van het aantal cellen gedurende lange tijd worden de twee soorten propolismonsters geconfigureerd met verschillende concentraties (0,005%, 0,01%, 0,02%, 0,04%, 0,08%, 0,16%, 0,31%, 0,63%) van verschillende verschillen concentraties. Onderzoek van het testmateriaal. Wanneer het celbestratingspercentage 40%tot 60%bereikt, wordt deze toegediend. Nadat de toediening is voltooid, wordt de tablet geplaatst in een CO2 -kweekbox van 37 ° C en 5%. Voeg de MTT -werking toe Oplossing, renoveer het licht van 37 ° C.4 uur, laat de vloeistof verlaten, voeg 150 mu; l tweede gebaseerde basenub -macaron toe, lees de D490 nm -waarde met het enzymlabel.

 

1.5 Testen van anti -lampverouderingseffecten op basis van menselijke fibroblasten

 

De anti -verage -effecttest is een oxidatiebeschadigmodel op basis van UVA -straling in fibroblasten. Gene MMP-1-expressie en MMP-1-gehalte om de werkzaamheid van te testen actieve objecten te evalueren. Het testontwerp is zoals weergegeven in tabel 1.

 

 

1.5.1 ROS-onderdrukking Snelheidsdetectie. Celvertering tot 6 -gatplaten, 24 uur in 37 ° C en 5% CO2 -kweekbox. Volgens het testontwerp van tabel 1, configureer verschillende concentraties. Voor groepsbeheer zijn er 3 restauratiegaten in elke groep. 37 ° C, 5%CO2-kweekbox incubatie en training 24 uur. Volgens de testgroep voert de lege controlegroep direct ROS-activiteitstesten uit;]

 

DOT; CM-2 UVA voor straling. Na de straling. is over, after the ROS activity detection .

 

Neem de digestie van het aantal langdurige cellen dat moet worden gevaccineerd met 6-holes platen tot 6-holes platen 37 ° C en 5% CO2-kweekbox Cultiveer 24 uur. Volgens het testontwerp (tabel 2) configureer het testmateriaal met verschillende concentraties. Nadat de kweek is voltooid, verzamel u de celkweekvloeistof voor de volgende stap van ELISA -test. Gebruik PBS om de cellen voorzichtig te reinigen 3 3 3 Tweede, gebruik RNA-isoplus scheurende cellen, voeg 1 ml barstoplossing per gat toe. De kamertemperatuur wordt 5 minuten geplaatst, die wordt gesplitst en overgebracht naar 1,5 ml RNase-vrije Eppedorf-buis, extract RNA, synthetiseert cDNA en voert elastin uit en voert elastin uit en voert elastin uit en voert elastin uit en voert elastin uit en voert elastin uit en voert elastin uit en voert elastin uit en voert elastin uit en voert elastin uit en voert elastin uit en voert elastin uit en voert elastine uit genexpressiedetectie.Gebruik de 2- △ △ △ CT-berekeningsmethode voor gegevensverwerking en gebruik de t-testmethode voor statistische analyse. De blanco controlegroep mRNA-amplificatie meerdere wordt verwerkt. In vergelijking met de blanco controlegroep is de monstergroep significant 0,05 Het verschil is aanzienlijk verschillend en het gelabelde als*, p lt; 0,01 geeft aan dat het verschil extreem significant is. In de 1,5 ml EP-buis wordt het gebruikt voor MMP-1 ELISA-detectie. De verzamelde kweekvloeistof 1000 g is bespaard na de centrifugaal -20 ℃ en de MMP -1 -eiwit ELISA -test. Elke groep monsters is ontworpen met 3 parallelle gaten.

 

 

2 resultaten en analyse

 

2.1 HPLC-analyse van propolis-extract

 

De resultaten van het zeer efficiënte vloeibare kleurspectrum van propolis weken worden getoond in figuur 1. De 5 flavonoïde monomeren met de hoogste hoogste piek in dit experiment zijn erythrine, dennengotine, Elenethyl Acetaat, ethyl en poplarine Gao Liang Gingerin. Het gehalte in propolis-extract is 3,57%van de chlorofyllin, 4,61%van dennen , 7,62%van het elaat-3-acetaat, 5,16%van de poplarine en 2,07%. ]

 

 

2.2 De resultaten van cytotoxische detectie

2.2.1 MTT Testresultaten Monstermonsters van hoog tot laag, Set 8 toedieningsconcentraties , op menselijke vezelige cellen voor cytotoxische testtests, worden de trend van cytotoxische detectieresultaten en de trend van celvitaliteitsveranderingen getoond in figuur 2.

 

 

 

De 8 concentraties geselecteerd door de geselecteerde steekproef als de horizontale coördinaten, mensen worden succesvol, mensen zijn succesvol De relatieve vitaliteitswaarde van de vezelcellen is verticale coördinaten en de relatieve vitaliteitscurve van cellen wordt getekend. Selecteer de concentratie van keerpunt met een relatieve vitaliteitswaarde van de cel als de maximale concentratie van de veiligheidstoediening. Volgens de MTT -testresultaten wanneer de concentratie van oplossingsmonster 0,08%is, is de relatieve vitaliteitswaarde van de cellen 128,27%en heeft geen cytotoxiciteit; wanneer de concentratie van propolis polyethyleenglycoloplossing monster 0,08%is, 0,08%, 0,08%, 0,08%, 0,08%, the cell relative vitality value is 126.16%, and cytotoxicity.

 

2.2.2 The results of the morphological detection are based on the MTT test results. Select 5 concentration for morphological testing. See Figure 3 and Figure 3 .

 

Volgens de resultaten van de morfologische resultaten. Uit: wanneer de concentratie van propolis ethanoloplossing en propolis polyethyleenglycoloplossing 0,08%is, is de celrandcontour duidelijk en de morfologische regels, is er geen duidelijke deeltjes. Materie in de cel, en er is geen duidelijk verschil tussen de celstatus van de oplosmiddelcontrolegroep. Daarom, volgens de MTT -resultaten en morfologie, werden de propolis ethanoloplossing en propolis polyethyleenglycoloplossingsmonster uiteindelijk bepaald op basis van mensen .De maximale veiligheidsconcentratie van vezelcellen is niet groter dan 0,08%.

 

 

2.3 De detectieresultaten van het anti -lichtverouderingseffect

2.3.1 ROS -remmende Snelheid De detectieresultaten zijn gebaseerd op UVA om het oxidatieschademodel van fibroblasten te stimuleren. Door veranderingen in het ROS -gehalte te detecteren, wordt het antioxidanteffect van het te gemeten actieve object bepaald. De analyse van ROS -detectieresultaten en ROS -onderdrukkingssnelheid wordt aangetoond In figuur 5.

 

toonde de testresultaten aan dat vergeleken met de onbeheerde BC Groep, het ROS -gehalte na de UVA -straling nam aanzienlijk toe (P LT; 0,01), wat aangeeft dat het oxidatiebeschadigmodel succesvol was; vergeleken met de UVA -bestralingsgroep, de PC De groep Ve VEE aanzienlijk verminderde het ROS -gehalte (P Lt (P LT ; 0,01). Toen het propolis -ethanoloplossingsmonster 0,08%van de toedieningsconcentratie was, was het ROS -gehalte significant verminderd (P LT; 0,01) en was de ROS -remmende snelheid 13,39%. Wanneer het propolis polyethyleenglycoloplossing monster 0,08%van de toedieningsconcentratie is, is het ROS -gehalte aanzienlijk verminderd (P LT; 0,05) en de remmende snelheid is 11%, wat aangeeft dat het monster het effect heeft van het verwijderen van ROS en het bereiken van antioxidant. .]

 

vergeleken met de lege controle BC-groep, heeft de negatieve controle NC-groep de UVA-straling doorgegeven, de MMP-1-expressie en het MMP-1-gehalte aanzienlijk toegenomen (P LT; 0,01 ), en het geeft aan dat het UVA-model succesvol is; vergeleken met de negatieve controle NC (UVA-straling), is de MMP-1-expressie van de twee monstergroepen aanzienlijk verminderd (P LT; 0,05), dat een onderdrukkingseffect heeft Op MMP-1-genniveau; 2 is het MMP-1-gehalte van de steekproefgroep extreem significant (P LT; 0,01), waarvan het MMP-1-gehalte van de behandelingsgroep voor propolis ethanoloplossing lager is dan de BC-groep die dat is niet bestraald. 0,08%kan de synthese van MMP-1 remmen onder de concentratie van 0,08%, zodat twee monsters de afbraak van ECM door ECM kunnen remmen door de expressie van MMP-1 te remmen, waardoor een bepaald effect van antidight veroudering wordt bereikt .

 

3 Discussie

 

vergeleken met de negatieve controle NC (UVA+) groep, zijn de propolis ethanoloplossing en propolis polyetteroloplossing op 0,08 %toedieningsconcentratie bij 0,08%. Het heeft een zeer significant verlagingseffect op het ROS-gehalte; en het kan de hoeveelheid MMP-1-genexpressie in het fibroblast-gerelateerde MMP-1-gen aanzienlijk verminderen; het heeft een zeer significante vermindering Effect op het MMP-1-gehalte. Enerzijds kan de ethyleenglycoloplossing voorkomen dat de productie van huidveroudering geïnduceerd door vrije radicalen door actieve zuurstof ROS te verwijderen, en de andere zijde heeft een significant remmend effect op MMP-1 op genetische niveaus en eiwitniveaus. De afbraak van afbraak om het effect van anti -lichtveroudering te bereiken. Vergeleken met 75%polyethyleenglycol als oplosmiddel,75%ethanol wordt gebruikt als oplosmiddelen om propolis op te lossen om ROS, hogere remmingssnelheid, meer oxidatiegerelateerde genen MMP-1 mRNA en lager MMP-1-gehalte te remmen; kan worden gespeculeerd dat propolis ethanoloplossing hoger heeft dan propolis polyethyleenglycoloplossingen. Anti -light verouderende activiteit.

Op dit moment is het voorkomen en uitstellen van huidveroudering een van de onderzoekshotspots geworden op het gebied van geneeskunde, cosmetica en biomaterialen. De veroudering van de huid kan worden verdeeld in endogene veroudering en secundair Optreden van interne factoren. Externe veroudering veroorzaakt door externe factoren, waarvan ultraviolette straling de belangrijkste factor is [21]. Veilige en effectieve preventie en behandeling van de ontwikkeling van licht verouderende product is een belangrijke richting voor gerelateerde industrieën. Huidlichtverouderingsproducten bieden nieuw Ideeën om de verdere ontwikkeling van de bijenproductindustrie te bevorderen. Maar het huidige onderzoek heeft nog steeds een aantal tekortkomingen. Allereerst het onderzoek naar anti -lichtveroudering, zoals propolis geactiveerde ingrediënten, fenolzuur en pyrine klein. Ten tweede, ten tweede, in dit stadium, in dit stadium in dit stadium. , er zijn onvoldoende onderzoek naar apoptose -gerelateerde genen en veroudering -gerelateerde indicatoren, zoals celcyclus, mitochondriaal fusie -eiwit en oxidatie. Coördinatie, in plaats van eenvoudigweg de remmende of bevordering van een bepaald materiaal of signaalroute te remmen of te bevorderen. worden toegepast op de preventie en behandeling van anti -lichtveroudering vereist nog steeds veel in -diepte -onderzoek.